Реакция непрямой гемагглютинации (рнга), или реакция пассивной гемагглютинации (рпга)

Содержание:

Классификация тестов по типу применяемого антигена. Трепонемные и нетрепонемные тесты на сифилис

В современной венерологии для диагностических целей используется более десятка вариантов серологических реакций на сифилис, которые можно подразделить по разным критериям на различные категории. Классификацию проводят по методологии проведения исследований, области применения, скорости, дешевизне, требованиям к лабораторной оснащенности и т.д. 

По типу используемых антигенов, диагностические тесты традиционно разделяют на две группы— нетрепонемные и трепонемные серологические тесты. 

Трепонемные реакции теоретически более специфичны, однако они также дают ложноположительные результаты. Более того, они не позволяют дифференцировать нелеченный и излеченный сифилис. Результаты трепонемных реакций будут положительными в обоих случаях. Нетрепонемные реакции позволяют различать нелеченную или недавно перенесенную и излеченную инфекцию.

При обследовании рекомендуется проводить и трепонемную, и нетрепонемную реакции. Для установки и подтверждения диагноза «сифилис» требуются положительные результаты при проведении тестов обоих типов — трепонемных и нетрепонемных. Поэтому нетрепонемные тесты применяются в комбинации с трепонемными тестами, и проводятся до начала, в процессе и после окончания лечения в определенные временные интервалы.

1. Нетрепонемные тесты

Наиболее известные из нетрепонемных тестов с визуальной расшифровкой результатов  — это

  • RW — реакция Вассермана с липидными антигенами (реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном, РСКк) 
  • реакция Канна (не используется в настоящее время), 
  • цитохолевая реакция Закс-Витебского (не используется в настоящее время), 
  • микрореакция преципитации с плазмой или инактивированной сывороткой (МРП или РМП), 
  • RPR (тест быстрых плазменных реагинов, Rapid Plasma reagin), 
  • TRUST (тест с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой, Toluidin Red Unheated Serum Test). 

Среди нетрепонемных тестов имеются 2 теста с микроскопическим считыванием результатов реакции:

1. VDRL — (Venereal Disease Research Laboratory);

2. USR — тест определения активных реагинов плазмы (Unheated Serum Reagins). 

Реактивность в нетрепонемных тестах обычно указывает на повреждение тканей и не всегда специфична в отношении сифилиса. Простота выполнения и низкая стоимость позволяет использовать их как отборочные реакции при установлении предварительного диагноза сифилиса.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются специфические антигены трепонем. Эти тесты обязательны для подтверждения диагноза (РПГА, РИТ, РИФ и ИФА). Они являются более сложными и дорогостоящими, чем тесты 1-й группы, но и более специфичными и чувствительными. Выявление антител в спинно-мозговой жидкости также производится с помощью трепонемных тестов.

Традиционные трепонемные реакции, подтверждающие диагноз сифилиса, требуют дорогого лабораторного оборудования и опытного персонала, поэтому они редко проводятся вне специализированных лабораторий. Однако сейчас их можно заменить простыми и быстрыми трепонемными реакциями, которые возможно проводить на местах и в которых используется цельная кровь

Проведение этих реакций не требует длительного обучения, специальных условий для хранения реактивов и оборудования. 

Сравнительная дешевизна, удобство и практичность трепонемных экспресс- реакций привлекают к ним внимание не только как к методам подтверждения диагноза. Эти реакции могут применяться для скрининга сифилиса в рамках оказания первичной медицинской помощи (их можно проводить на местах, в том же лечебно-профилактическом учреждении) или в районах, где лаборатории не доступны

Однако поскольку антитела к T. pallidum определяются на протяжении ряда лет независимо от того, лечился больной или нет, трепонемные экспресс-реакции нельзя использовать для оценки эффективности лечения и дифференциальной диагностики нелеченного и излеченного сифилиса.

Реакция лизиса (РЛ)

Сыворотка, попадающая в организм пациента, наделена, помимо основной функциональной задачи — обеспечения пассивного иммунитета, еще и растворяющими свойствами. Она способствует растворению микробов, клеточных чужеродных элементов и вирусов, поступающих в организм пациента. В зависимости от состава антител сыворотки подразделяются на бактериолизины, цитолизины, спирохетолизины, гемолизины и другие. Эти антитела носят название комплимента. Антитела содержат практически все жидкости человеческого организма, они имеют непростую белковую структуру и очень чувствительны к повышению температурного режима, встряхиваниям, воздействию кислоты и прямого солнечного света. Но в сухом состоянии способны сохранять свои лизирующие свойства до 6 месяцев.

Проводят следующие серологические реакции крови этого типа: бактериолиз, гемолиз.

Реакция бактериолиза проводится с использованием сыворотки крови больного и специфической иммунной сыворотки с активными микробами. Если в крови находится достаточно комплимента, то лаборант станет свидетелем лизиса бактерий, а реакция будет сочтена положительной. Вторая разновидность серологической реакции данного типа заключается в том, что эритроциты пациента обрабатываются с помощью сыворотки, которая содержит гемолизины, активизирующиеся только при наличии какого-либо вида комплимента. Если он присутствует, то исследователь будет наблюдать растворение эритроцитов. Именно этот способ используется при проведении реакции Вассермана (сифилис).

Использование серологических методов для диагностики сифилиса

В основе серологических лабораторных методов диагностики сифилиса лежит способность организма давать иммунный ответ на появление возбудителя. С помощью серологических реакций в сыворотке (плазме) крови (или цереброспинальной жидкости) выявляют следы иммунного ответа на заражение, а именно антитела к антигенам бледной трепонемы, или же сами антигены. 

Для того, чтобы установить специфический характер имеющихся клинических проявлений (т.е. что они являются следствием именно сифилиса) и, в дальнейшем, контролировать динамику патологического процесса, предложено большое количество серологических методов исследований. Эти же методы также широко применяют для скрининга населения. 

В соответствии с действующими национальными руководствами и клиническими методическими рекомендациями, во многих странах мира при обследованиях населения с целью выявления больных сифилисом и при установлении клинического диагноза используются передовые серологические методы. Их применяют как при наличии клинических признаков болезни у пациентов, так и в латентные периоды. 

Постановка серологических реакций — один из наиболее надежных методов диагностики сифилиса. Стандартизованные серологические реакции с регламентированной методикой постановки называются серологическими тестами на сифилис. Учитывая то, что почти все серологические реакции на сифилис в определенных условиях могут быть ложноположительными или ложноотрицательными, их следует ставить в комплексе и, при необходимости, в динамике. 

Серологические реакции, которые используются для определения антител в сыворотке крови больного, отличаются друг от друга чувствительностью, специфичностью, сложностью постановки и стоимостью. Помимо классических методов, для эффективной серодиагностики сифилиса используются иммунологические тесты и технологии, получившие в 21 веке новый импульс к развитию. 

Антитела выявляются различными иммунохимическими (серологическими) методами, среди которых осадочные реакции, иммуноферментный, иммунохемилюминесцентный, иммунохроматографический анализы, линейный иммуноблоттинг, исследование с применением проточной флюорометрии, технология иммуночипов и другие.

Серодиагностика (исследование с помощью серологических методов) применяется для:

  • подтверждения клинического диагноза сифилиса, 
  • постановки диагноза скрытого сифилиса, 
  • контроля за эффективностью лечения, как один из критериев излеченности больных сифилисом, 
  • профилактики сифилиса (скрининговое обследование определенных групп населения с целью выявления патологии). 

Подготовка

Стоит сразу правильно подготовиться к исследованию, чтобы сразу получить максимально точные результаты. А что может спровоцировать недостоверные данные анализов:

  • употребление за сутки кофе, алкоголя любой крепости, продуктов с высоким содержанием жиров и простых углеводов;
  • длительное пребывание под открытыми лучами солнца;
  • прием препаратов с противомикробными, противовирусными или антибактериальными свойствами;
  • чрезмерная двигательная активность, тяжелые физические нагрузки в течение суток перед анализом;
  • забор биологического материала у пациентов, которые только недавно завершила химио- или антибиотикотерапию.

Сдавать серологический анализ крови из локтевой вены обычно нужно в утренние часы. Если пациент по медицинским показаниям не должен пропускать прием пищи, то анализ проводится через пять часов. Необходимо не курить хотя бы за 30 минут до сдачи крови и согласовать прием или отмену лекарственных препаратов с лечащим врачом. Исследование не может быть проведено при плохом самочувствии пациента — слабости, повышенной температуре тела, в том числе из-за протекающей в организме инфекции, обострении любой хронической патологии.

Расшифровка результата

Анализ проводится путем добавления к образцу специального реактива. При наличии в крови бледной трепонемы происходит реакция агглютинации, и эритроциты выпадают в осадок. По числу склеенных эритроцитов можно делать выводы о том, сколько антител присутствует в образце.

Результаты тестирования оцениваются по 4-балльной системе, по размеру сформировавшейся пленки. При появлении реакции агглютинации эритроциты остаются на поверхности лунки, образуя собой «зонтик». При отрицательном результате они опускаются вниз и скапливаются на дне в центре лунки.

Результат тестирования расшифровывается таким образом:

  • «-» – отрицательный результат. При нем красные кровяные тельца опускаются на дно, образуя компактный осадок;
  • «1+» – неоднозначная реакция. Эритроциты формируют неплотный осадок с нечеткими краями и просветом в середине;
  • «2+» – слабоположительная реакция. Внизу лунки появляется пленочка, образуя плотное кольцо с выраженным просветлением в центре;
  • «3+» – положительная реакция. Красные кровяные тельца почти целиком застилают лунку, при этом вокруг осадка образуется четкое кольцо;
  • «4+» – положительная реакция. При РПГА 4+ эритроциты формируют зонтик и равномерно застилают лунку.

Положительный результат

Если тестирование дало положительную ответную реакцию, это говорит о присутствии в организме возбудителя болезни. В этом случае пациенту назначают дополнительные лабораторные и инструментальные анализы, отталкиваясь от которых можно будет подтвердить или опровергнуть наличие заболевания.

При положительном результате сдать анализ РПГА необходимо провести человеку, с которым инфицированный вступал в половой контакт. Стоит учитывать, что примерно в 5% случаев анализ РПГА дает ложноположительный результат. Чаще всего это связано с игнорированием правил подготовки.

Также ложноположительная реакция может проявиться в следующих случаях:

  • формирование онкологических новообразований;
  • гепатит разных форм;
  • ВИЧ.

В редких случаях ложноположительная реакция является признаком беременности. Отличительная особенность ложноположительного ответа – он сопровождается низким титром. Также стоит учитывать, что анализ может быть положительным, если пациент уже был болен сифилисом, но прошел успешное лечение.

Отрицательный результат

Отрицательная реакция РПГА говорит о том, что:

  • возбудитель сифилиса отсутствует в организме;
  • с момента инфицирования прошло менее 3-х недель. На столь раннем этапе иммунная система не начинает выработку антител;
  • неправильное проведение забора крови.

Если врач подозревал сифилис у пациента, но тестирование показало отрицательный результат. Через некоторое время рекомендуется сдать анализ повторно, чтобы убедиться в отсутствии патогенных микроорганизмов в сыворотке крови.

Серология на практике

Серологический анализ «заточен» только на поиск в плазме двух вещей: антигенов и антител. Известно, что все патогенные микроорганизмы и бактерии выделяют особые факторы патогенности, или вредоносности – антигены, токсины и другие вещества. В ответ организм вначале учится распознавать новый источник опасности, а затем обученные лимфоциты вырабатывают особые белки – гамма – глобулины, или антитела. Каждое антитело подходит к молекуле антигена, и блокирует ее активные центры, подходя к ней, как «ключик» к «замочку». Вот обнаружением самых разных антигенов и образовавшихся на их внедрение антител и занимается лаборатория, проводящая серологические анализы.

Можно даже сказать, что серологический анализ – это биохимическое исследование, которое направлено на поиск инфекционных болезней.

Методы серологической диагностики и ее возможности

Поскольку сыворотка – это жидкость, и многие серологические реакции связаны с введением капель, разведением растворов, кратностью – основой серологии является титр. В результате анализа можно прочитать, например, «титр антител 1\10». Врач говорит, что вы здоровы. Но если в анализе, например, титр 1/500, то врач хватается за голову, и говорит, что вы инфицированы. Что значат эти дроби? Ведь вторая дробь гораздо меньше первой, но почему она опаснее?

Очень просто: это степень разведения. В первом случае сыворотка, разведенная в 10 раз (10%) прореагировала со специфическим антигеном, а во втором – разведенная в 500 раз (0,2%). Во втором случае речь идет об очень высокой концентрации антител у больного человека, которые даже в таком разведении обнаруживаются серологической реакцией. Какие же ухищрения, кроме титра антител, существуют в диагностике?

Эти исследования отражают изменения, или динамику антител и защитных сил организма. Они хорошо оценивают напряженность иммунитета, который возникает после правильно проведенных прививок (поствакцинальный иммунитет). Серологическая диагностика в современной лаборатории чаще всего использует два метода: иммуноферментный анализ (ИФА) и реакцию иммунофлуоресценции мечеными антителами (РИФ).

Задачами серологического исследования являются:

  1. Определение антител в сыворотке к инфекционному заболеванию, с помощью постановки реакций с известными антигенами. То есть, например, врач назначает обследование на подозреваемую инфекцию, например, на брюшной тиф. Ставится реакция с брюшнотифозным антигеном для выявления специфических, вырабатываемых только против брюшнотифозных бактерий антител.
  2. Вторая задача может считаться обратной. В сыворотке определяется антиген, или продукты жизнедеятельности микроорганизмов с помощью известных диагностикумов, которые называются антисыворотками.

К классическим реакциям относятся: реакция агглютинации и ее развернутая форма, или пассивная гемагглютинация. Есть реакция преципитации, реакция лизиса, реакция связывания комплемента и так далее. Вряд ли необходимо описывать особенности и технику постановки каждый из этих реакций. Вместо этого, в заключение лучше перечислить плюсы и минусы серологических анализов.

Серологические методы диагностики инфекционных заболеваний.

Серологические критерии диагностики основаны на специфических реакциях «антиген-антитело». Реагируют антигены (компоненты клеточных стенок, жгутиков, капсул, ДНК и токсинов) тех микроорганизмов, которые необходимо определить, с антителами, содержащимися в сыворотках. Между антигенами и соответствующими им антителами происходит связывание, что и положено в основу методов серологической диагностики. Серологические реакции применяются для определения неизвестного антигена (источником которого является бактерия, вирус, токсин и др.) с помощью известного антитела или для определения антитела в сыворотке с помощью известного антигена.

Серологические реакции классифицируют в зависимости от состояния антигена и особенностей среды, в которой взаимодействуют антиген и антитело, а также по способу проведения. 

Для проведения серологических реакций испольуют множество лабораторных методов, таких, как агглютинация, преципитация, связывание комплемента, иммунофлуоресценция, иммуноферментный и радиоиммунный анализ и другие. Эти реакции позволяют эффективно проводить предварительную идентификацию микроорганизмов. 

Сыворотки, которые необходимы для постановки серологических реакций, получают экспериментальным путем, в частности, их производят институты вакцин и сывороток, и предлагают в составе коммерческих диагностических наборов.

Серологические методы являются важным инструментом в диагностике и лечении инфекционных заболеваний человека и животных, поскольку с их помощью можно не только идентифицировать возбудителя заболевания, но и обнаружить в крови больных и переболевших специфические антитела к соответствующим возбудителям. Серологические методы в настоящее время являются самыми эффективными методами диагностики при невозможности или трудностях выделения возбудителя, и сравнительно редко дают ложноположительные и ложноотрицательные результаты.

Методы серологических исследований

Способов проведения диагностики множество, как и заболеваний, которые они выявляют. Наиболее значимые:

  1. Агглютинация.
  2. Преципитация
  3. Гемагглютинация.
  4. Торможение гемагглютинации.
  5. Непрямая реакция Кумбса.
  6. Коагглютинация.
  7. Преципитация.
  8. Двойная радиальная иммунодиффузия.
  9. Реакция связывания комплемента (РСК).
  10. Иммунофлюоресценция (РИФ).
  11. Иммуноферментный метод (ИФА).
  12. Нейтрализация.

Чаще всего в лабораториях применяют ИФА, РИФ, РСК, реакции агглютинации.

Иммунофлюоресцентный метод (РИФ)

Для проведения исследования необходим биологический материал пациента, люминесцирующая жидкость. Второй компонент содержит антитела к предполагаемому возбудителю заболевания, которые помечены флуоресцеинизотиоционатом.

Виды РИФ:

  1. Прямой – материал пациента смешивают с мечеными антителами, если это срез ткани, обрабатывают его поверхность. Если возбудитель присутствует, образуется светящийся комплекс.
  2. Непрямой – проводят в 2 этапа. На первом в сыворотку или другой материал добавляют немеченые (первые) антитела. На втором вводят меченые (вторые) антитела против первых.

Полученные комплексы исследуют под люминесцентным, оптическим микроскопом ручным способом или автоматическим с помощью микрочипового цитометра. Из-за флуоресцентного вещества комплексы при затемнении излучают зеленое свечение, яркость которого отмечают плюсами от 1 до 4. Чем меньше плюсов, тем меньше комплексов с возбудителем заболевания.

Иммуноферментный метод

Как и РИФ, основан на маркировке чужеродного материала или белковых иммунных компонентов. В качестве маркировочного вещества выступают различные ферменты, которые имеют высокую специфичность, умеренную каталитическую активность, стабильность при образовании комплексов. Методы ИФА: гомогенные, гетерогенные. При первых все реакции происходят в жидком растворе. При вторых реакции проводят при участии твердого носителя.

Суть ИФА заключается в образовании комплексов иммунных белков человека с чужеродными антигенами сначала в жидком растворе, затем на твердой фазе. Под ней подразумевают прикрепление антигенов, антител к стенкам лунок полистиролового микропланшета. То есть после смешивания материала пациента с антителами против возбудителя смесь переносят на поверхность с лунками, куда прикрепляются антитела, антигены. Дальше изучают состав материала.

Реакция связывания комплимента

Для исследования необходимы: кровь или другой материал пациента, сыворотка с антителами, комплимент. Сначала смешивают кровь с сывороткой – образуется комплекс. После добавляют комплимент, который связывается с комплексом. Если связи между антиген-антитело не образуется, то комплемент остается в свободном, несвязанном состоянии. Чтобы определить его состояние в исследуемой жидкости, добавляют гемолитическую смесь (эритроциты барана с гемолитической сывороткой). Если комплемент свободен, он соединяется с гемолитической смесью – реакция отрицательная, возбудитель не обнаружен.

Реакции, связанные с агглютинацией

Самые простые серологические реакции – с применением антибактериальной сыворотки. Исследуемую кровь пациента смешивают при комнатной температуре с различными сыворотками определенной концентрации. Результат оценивают по концентрации сыворотки, при которой произошла агглютинация. С помощью агглютинации определяют группу крови, резус-факторы.

Важно! 

Особенности проведения серологического анализа крови

Серологический анализ крови проводится для того, чтобы узнать, болеет ли человек определенными инфекционными заболеваниями или он абсолютно здоров. Серологическое исследование делают в лаборатории, после выдается расшифровка. Изучение позволяет выяснить, насколько далеко зашла болезнь, определить стадию заболевания. Определение процедуры и подробное описание этапов анализа освещает википедия.

Анализ крови на антитела показан при большом количестве заболеваний. Речь идет о редких и широко распространенных недугах. Известно, что антитела и антигены способны взаимодействовать. Именно эту особенность врачи и используют, проводя исследование.

Если человек болеет, происходит образование иммунных защитных комплексов. Врач, проводя исследование, добавляет антиген или антитело, а потом наблюдает за реакцией. Именно так становится понятно, какая инфекция присутствует в организме. После этого можно смело начинать лечение.

Серологический анализ крови выполняется следующим образом. Врач берет антиген возбудителя заболевания, добавляет его в сыворотку. В результате манипуляций начинается химическая реакция. Врач производит оценку и выдает результат.

Часто возникает ситуация, при которой события развиваются противоположным образом. Речь идет о том, чтобы определить, какое заболевание у человека. Сделать это можно по имеющимся антигенам. Чтобы их выявить, врач берет антитела и добавляет их в кровь.

Если необходимо узнать, какая группа крови у человека, также сдают материал

Врачи обращают пристальное внимание на то, какова свертываемость крови. Возможно, при исследовании будет выявлено отклонение от нормы, тогда, если не начать лечение, последствия могут быть плачевными. Речь идет не только о тромбозе, у человека возможен инфаркт

Кроме того, повышается вероятность инсульта

Речь идет не только о тромбозе, у человека возможен инфаркт. Кроме того, повышается вероятность инсульта.

Как подготовиться к анализу?

Если вы желаете пройти исследование, то помните о том, что это надо сделать натощак. Анализ крови берут в лабораториях. То, как протекает реакция, врач определяет, используя сыворотку крови. Именно по ней можно понять, как взаимодействуют антигены и антитела. Полученная информация позволяет представить полную картину. Врач, опираясь на результат исследования, назначит наиболее эффективное лечение. Поэтому, если есть возможность, обязательно сдайте материал.

Соблюдайте диету хотя бы в день, предшествующий дню сдачи материала. Не ешьте жирного, сладкое также стоит исключить. Не съедайте слишком много пищи за раз. Алкоголь полностью исключите. Кроме того, не стоит изнурять себя физическими нагрузками. Поскольку стресс может стать причиной искажения результатов, избегайте его перед тем, как сдавать анализ крови.

Какие заболевания определяет анализ?

Если вы думаете, что у вас лямблии, амебиаз, то смело обращайтесь в лабораторию. Исследование материала покажет, если человек болен токсоплазмозом, описторхозом и рядом других заболеваний. Антитела станут сигналом к тому, что стоит начать лечение.

Данное обследование назначают для беременных, при подозрении на сердечно-сосудистую патологию. Варикозное расширение вен, аутоиммунные заболевания — все это показания для проведения исследования.

Кроме того, исследование делают:

  • после лечения;
  • до и после операции;
  • для оценки эффективности лечения.

В урологии и венерологии исследование делают чаще всего.

Что называют нормой?

Если по результатам видно, что антител нет, то это очень хорошо. Инфекция отсутствует. Но такое случается редко, особенно если раньше были все симптомы, указывающие на наличие заболевания. Как правило, серологический анализ часто становится последним подтверждением диагноза.

Обычно анализ крови на антитела делают два раза. Сначала просто определяют, есть ли инфекция. Второй раз анализ на антитела сдают для того, чтобы понять, насколько динамично идет процесс. Если количество связей между антителами и антигенами увеличилось, то идет заражение. Для того чтобы правильно выбрать лечение, врач должен получить больше информации. В такой ситуации проводятся дополнительные химические реакции. Так можно понять, с какой болезнью придется бороться. Кроме того, так определяется стадия болезни.

Результат исследования крови на антитела может быть только повышенным. Нормой является значение на отметке «ноль». Именно по этой причине результат не может быть пониженным.

Сущность методов, их преимущества и недостатки

Существует несколько серологических методов диагностики, но принцип их применения сводится к одному – к реакции “антиген-антитело”. Это основывается на том, что антиген инфекционного возбудителя, если он есть в крови обследуемого, обязательно даст специфическую реакцию на соответствующее антитело в контрольной (диагностической) сыворотке крови. И наоборот, антитело, если оно есть в крови обследуемого, даст реакцию на контрольный антиген, содержащийся в диагностикуме лаборанта.

Серологические анализы имеют существенные достоинства в диагностике многих заболеваний, а именно:

  • доступность и охват исследованиями широких масс населения,
  • относительная простота методик,
  • умеренная стоимость большинства исследований,
  • быстрота выполнения анализа (три-пять рабочих дней).

Тем не менее, у серологических исследований имеются и некоторые недостатки, например, необходимость инвазивного вмешательства при заборе крови, а что существеннее – в некоторых случаях невозможность отличить уже перенесенную инфекцию от текущей болезни.

Итак, из серологических исследований крови выделяют следующие методики:

  1. Реакция агглютинации (РА), чаще используется реакция не прямой, или пассивной агглютинации (РПГА). Основывается на поиске антигена (в данном случае, агглютиногена) в биологической жидкости пациента, или на поиске антител (агглютининов) в исследуемой сыворотке крови. Может применяться не только в диагностике инфекционных заболеваний, но и в определении ревматоидного фактора (РФ), а также в определении группы крови.
  2. Реакция связывания комплемента (РСК).
  3. Иммуноферментный анализ (ИФА).
  4. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

РПГА

РПГА выполняется следующим образом. Исследуется сыворотка крови пациента, в которой осуществляется поиск антигена или антител с помощью антительного или антигенного диагностикума, соответственно. При этом контрольные антитела или контрольные антигены фиксируются на эритроцитах барана или на частичках латекса размером не более 5-ти мкм. В том случае, если в крови выявляются искомые антитела или антигены, с контрольным диагностикумом происходит реакция агглютинации (склеивания), которую можно оценить визуально по наличию хлопьев или комочков в прозрачной среде диагностикума.

РСК

Отличие РСК заключается в следующем. Для поиска антител в исследуемой сыворотке крови к тому или иному антигену используется диагностикум, содержащий не только эритроциты барана, но еще и свободный комплемент. Комплемент- это белковый комплекс, способный активировать мембраноатакующий компонент. Эритроциты же сенсибилизированы собственными к ним антителами, поэтому здесь два пути развития событий. Первый – если антитела, допустим, к возбудителю коклюша у пациента в крови циркулируют, то система комплемента будет направлена на ликвидацию этих только что образовавшихся комплексов “антиген-антитело”, а эритроциты барана останутся нетронутыми. Гемолиза эритроцитов барана не произойдет – диагностикум останется прозрачным, с небольшим осадком на дне из эритроцитов барана. РСК положительная (гемолиза нет).

И второй путь – антител к коклюшу в крови пациента нет, тогда системе комплемента придется связать комплекс “антиген-антитело” на эритроцитах барана. В этом случае будет гемолиз эритроцитов барана, визуально это выглядит, как прозрачная однородная красно-оранжевая лаковая кровь. РСК отрицательная (гемолиз есть).

ИФА

Для проведения ИФА используются те же самые диагностикумы, но меченые ферментами (щелочная фосфатаза, пероксидаза и др). Таким образом, на положительные комплексы “антиген – антитело” формируется реакция, результат которой с легкостью можно визуально оценить на специфических тест-системах. Преимущество ИФА в том, что результат готов уже через несколько дней, и даже часов – это экспресс-диагностика (чаще применяется при экспресс диагностике ВИЧ – инфекции).

РИФ

РИФ отличается от предыдущих методик тем, что в последнем случае антитела к определенным возбудителям помечаются флюоресцентными веществами. При рассмотрении исследуемых образцов ткани пациента, обработанных мечеными антителами, в люминисцентном микроскопе образуемые комплексы “антиген – антитело” светятся, значит, реакция положительная.

Преимущества и недостатки

К главным достоинствам иммуноферментного анализа крови относятся:

  • Возможность выявления наличия в организме пациента патологии на ранних стадиях.
  • Постоянный контроль за развития болезни.
  • Быстрота и точность получаемого результата.
  • Отсутствие необходимой подготовки больного к исследованию и финансовая доступность метода.

К недостаткам данного метода лабораторной диагностики можно отнести получаемый в редких случаях ложноотрицательный анализ, что влечёт за собой необходимость периодического контрольного тестирования.

Взятие крови для диагностики 

Широкое применение иммуноферментный анализ крови получил при диагностике вирусных заболеваний, урогенитальных инфекций, патологии эндокринной системы, онкологии, аллергологии и многих других заболеваний. Этот метод также востребован при проведении анонимного исследования на наличие ВИЧ, сифилиса и гепатита С

Это особенно важно при наличии явно неблагоприятной эпидемиологической обстановки с этими заболеваниями в стране и в мире

Хотелось бы надеяться, что наши медики продолжат широко использовать и усовершенствовать такой необходимый для широкого круга больных метод лабораторной диагностики.

Антитела IgG

Основная роль антител IgG — это длительная защита организма от большинства бактерий и вирусов — хотя их выработка происходит более медленно, но ответ на антигенный раздражитель сохраняется более устойчивым, чем у антител класса IgM.

Уровни антител IgG повышаются медленнее (через 15-20 дней после начала заболевания), чем IgM, но остаются повышенными дольше, поэтому могут показывать давно текущую инфекцию при отсутствии IgM АТ. IgG могут находиться на низком уровне в течение многих лет, но, при повторном воздействии того же антигена, уровень антител IgG быстро повышается.

Для полной диагностической картины необходимо определить антитела IgA и IgG одновременно. При неясном результате IgA, подтверждение осуществляется определением IgM. В случае положительного результата и для точной диагностики второй анализ, сделанный через 8-14 дней после первого, должен быть проверен параллельно для определения роста концентрации IgG. Результаты анализа должны интерпретироваться в комплексе с информацией, полученной в других диагностических процедурах.

Антитела IgG, в частности, используются для диагностики Helicobacter pylori — одной из причин язвы и гастрита.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Adblock
detector